（BALB/c-hTIGIT, BALB/c-hPD1/hTIGIT, , BALB/c-hPD1/hPDL1/hTIGIT 、C57BL/6-hTIGIT, C57BL/6-hPD1/hTIGIT）

TIGIT (T cell immunoglobulin and ITIM domain)，是一个Ⅰ型跨膜蛋白，胞外区带有一个免疫球蛋白结构域，胞内含有ITIM结构域，主要在T-cell和NK-cell表面表达。

机制研究发现TIGIT的缺失导致MOG肽段免疫后的T细胞应答增强，显示TIGIT是T细胞的抑制性受体。

目前认为TIGIT对细胞的抑制功能通过两种方式实现，一种是TIGIT直接作用于细胞自身，通过下调TCRα链削弱介导的信号转导，从而抑制细胞的活化^[1]；另一种是通过触发APC上的PVR配体下游信号通路，增强信号分子ERK磷酸化水平，增强APC分泌抗炎因子IL-10，IL-10再反过来作用细胞，从而抑制T细胞应答^[2]。Genentech的TIGIT抗体MTIG7192A临床研究显示，单独或者和PD-L1抗体Atezolizumab联用可治疗晚期或转移性肿瘤。

构建策略：集萃药康通过将BALB/c及C57BL/6小鼠的TIGIT基因编码胞外区替换为相应的人源片段，完整保留了小鼠TIGIT蛋白的胞内部分，成功构建了TIGIT人源化小鼠模，包括单人源化小鼠BALB/c-hTIGIT及C57BL/6-hTIGIT,双人源化小鼠BALB/c-hPD1/hTIGIT及C57BL/6-hPD1/hTIGIT，和三人源化小鼠BALB/c-hPD1/hPDL1/hTIGIT。TIGIT人源化小鼠模型是人TIGIT抑制剂药效评价的理想动物模型。

1. BALB/c-hTIGIT/及B6-hTIGIT体内药效评价

分别在BALB/c-hTIGIT小鼠模型皮下接种CT26.WT肿瘤细胞系及B6-hTIGIT小鼠模型皮下接种MC38肿瘤细胞系后测试抗人TIGIT抗体的肿瘤抑制药效。

左图：BALB/c-hTIGIT体内药效；右图：B6-hTIGIT体内药效

基于BALB/c-hTIGIT与B6-hTIGIT的体内药效对比试验。对数生长期的结肠癌细胞CT26.WT与MC38分别皮下接种BALB/c-hTIGIT与B6-hTIGIT小鼠，待肿瘤生长至平均体积约80-120 mm³时随机分为对照组及anti-hTIGIT单药组（n=10），每周给药2次，共给药6次。数据以Mean ± SEM形式呈现。

结果显示：BALB/c-hTIGIT小鼠接种CT26.WT肿瘤后，使用抗人TIGIT抗体治疗，显示出良好的抗肿瘤效果（TGI=40.26%）; 而B6-hTIGIT小鼠接种MC38肿瘤后，使用抗人TIGIT抗体治疗，未见肿瘤抑制效果（TGI=12.03%）。

结果表明：与接种MC38细胞的B6-hTIGIT小鼠模型相比，抗人TIGIT抗体在接种CT26.WT细胞的BALB/c-hTIGIT小鼠模型体内药效更显著，说明BALB/c-hTIGIT小鼠模型是评估抗人TIGIT药效的理想模型。

2. BALB/c-hPD1/hTIGIT及B6-hPD1/hTIGIT体内药效

分别在BALB/c-hPD1/hTIGIT小鼠模型皮下接种CT26.WT肿瘤细胞系及B6-hPD1/hTIGIT小鼠模型皮下接种MC38肿瘤细胞系后测试抗人TIGIT抗体的肿瘤抑制药效。

左图：BALB/c-hPD1/hTIGIT体内药效；右图：B6- hPD1/hTIGIT体内药效

基于BALB/c-hPD1/hTIGIT与B6-hPD1/hTIGIT的体内药效对比试验。对数生长期的结肠癌细胞CT26.WT与MC38分别皮下接种至 BALB/c-hPD1/hTIGIT与B6-hPD1/hTIGIT。待肿瘤平均体积生长至80-120 mm³时，随机分为对照组及Anti-hTIGIT单药组（n=6），每周给药2次，共给药6次。数据以Mean ± SEM形式呈现。

结果显示： BALB/c-hPD1/hTIGIT小鼠接种CT26.WT肿瘤后，使用抗人TIGIT抗体治疗，显示出良好的抗肿瘤效果（TGI=79%，而B6-hPD1/hTIGIT小鼠接种MC38肿瘤后，使用抗人TIGIT抗体治疗，未见肿瘤抑制效果。因此，与接种MC38细胞的B6-hPD1/hTIGIT小鼠模型相比，抗人TIGIT抗体在接种CT26.WT细胞的BALB/c-hPD1/hTIGIT小鼠模型体内药效更显著。

结果表明：BALB/c-hPD1/hTIGIT小鼠模型是评估抗人TIGIT药效的理想模型。

3. BALB/c-hPD1/hTIGIT：评价Keytruda与Triagolumab、M Triagolumab 抗体抗肿瘤药效作用

在BALB/c-hPD1/hTIGIT小鼠模型皮下接种CT26.WT肿瘤细胞系测试抗人PD1抗体（keytruda）、Triagolumab及M Triagolumab的肿瘤抑制药效。

（数据来自第三方合作验证）

基于BALB/c-hPD1/hTIGIT小鼠药效实验。对数生长期的结肠癌细胞CT26.WT皮下接种至 BALB/c-hPD1/hTIGIT小鼠。待肿瘤平均体积生长至80-120 mm³时，随机分为Human IgG1组，Keytruda单药组、Tiragolumab单药组、M Tiragolumab单药组及Keytruda+ Tiragolumab联合给药组（n=8），每周给药2次，共给药6次。数据以Mean ± SEM形式呈现。

结果显示：Keytruda治疗组和Tiragolumab治疗组，其肿瘤体积的抑制率（TGI）分别为56.79%、75.34%，显示对肿瘤的生长有一定的抑制作用；联合用药组Keytruda+ Tiragolumab联合给药组显示出更为显著的肿瘤抑制作用， TGI为88.94%。M  Tiragolumab将Tiragolumab的Fc部分进行突变，从而消除Tiragolumab介导ADCC(抗体依赖性细胞介导的细胞毒性作用)，无法有效抑制肿瘤生长(TGI=10.04%)。

结果表明： BALB/c-hPD1/hTIGIT小鼠是筛选和评价人源PD1、TIGIT抗体及联合用药的理想动物模型，同时可以用于抗体药物ADCC作用的评价。

参考文献

[1] Joller, Nicole, et al. "Cutting edge: TIGIT has T cell-intrinsic inhibitory functions." The Journal of Immunology 186.3 (2011): 1338-1342.

[2] Stanietsky, Noa, et al. "The interaction of TIGIT with PVR and PVRL2 inhibits human NK cell cytotoxicity." Proceedings of the National Academy of Sciences 106.42 (2009): 17858-17863.