（C57BL/6-hLAG3, C57BL/6-hPD1/hLAG3, BALB/c-hLAG3, BALB/c-hPD1/hLAG3）

LAG3（Lymphocyte activation protein 3），淋巴细胞活化蛋白3，在活化的T淋巴细胞、B淋巴细胞、自然杀伤细胞和浆细胞样树突状细胞上表达^[1,2]。LAG3基因编码的膜蛋白包含四个免疫球蛋白超级家族结构域，在结构和染色体定位方面与CD4非常相似^[3]，但它以更高的亲和力与MHC II（主要组织相容性复合体II类分子）结合^[4]，并负调节T细胞的功能^[5,6]。研究表明，敲除LAG3基因或体内抗体阻断LAG3功能，可使器官或肿瘤中的抗原特异的CD8+T细胞的聚集和效应功能增加^[7]。因此，阻断LAG3是一种潜在的肿瘤治疗方法。

构建策略：集萃药康通过将BALB/c及C57BL/6小鼠Lag3基因编码胞外区的部分替换为相应的人源基因序列，保留了鼠Lag3基因的胞内信号转导区，成功构建了LAG3人源化小鼠模型，包括单人源化小鼠BALB/c-hLAG3及C57BL/6-hLAG3和双人源化小鼠BALB/c-hPD1/hLAG3及C57BL/6-hPD1/hLAG3。LAG3人源化小鼠模型是人LAG3抑制剂药效评价及安全性评价的理想动物模型。

1. C57BL/6-hLAG3：mPD1和hLAG3抗体药效实验

在B6-hLAG3小鼠皮下接种MC38肿瘤细胞系后测试抗人LAG3抗体肿瘤抑制药效。

左图：小鼠肿瘤生长曲线  右图：小鼠体重变化曲线

基于B6-hLAG3小鼠皮下接种MC38模型的体内药效实验。 将结肠癌细胞MC38培养至对数生长期后接种至6-8周龄的B6-hLAG3（LAG3人源化小鼠）皮下，待肿瘤生长至平均体积约90 mm³时随机分为Vehicle（对照）组、anti-mPD1单药组、anti-hLAG3单药组、anti-mPD1和 anti-hLAG3联用组（n=7），使用相应药物进行治疗。每周给药2次，共给药6次。数据以Mean ± SEM形式呈现。

结果显示：anti-mPD1单药组、anti-hLAG3单用组对肿瘤生长抑制作用小（anti-mPD1单药组TGI=19.13% , anti-hLAG3单药组TGI=21.13%），anti-mPD1和 anti-hLAG3联用组对肿瘤生长抑制作用大（TGI=40.69%）（左图），小鼠体重变化趋势一致（右图）。

结果证明：LAG3人源化小鼠是评估anti-hLAG3抗体体内药效的有力工具。

2. BALB/c-hPD1/hLAG3：Keytruda及Anti-hLAG3抗肿瘤药效

在BALB/c-hPD1/hLAG3小鼠模型皮下接种CT26.WT肿瘤细胞系后测试抗人PD1抗体KEYTRUDA®（Pembrolizumab）及Anti-hLAG3抗肿瘤抑制药效。

左图：小鼠肿瘤生长曲线   右图：小鼠体重变化曲线

基于BALB/c-hPD1/hLAG3小鼠皮下接种CT26.WT模型的体内药效实验。对数生长期的结肠癌细胞 CT26.WT皮下接种至BALB/c-hPD1/hLAG3小鼠，待肿瘤生长至平均体积约100 mm³时随机分为 Vehicle 组，Anti-LAG3 治疗组，Keytruda 治疗组（n=8）。每3天给药1次，共给药6次。数据以Mean ± SEM形式呈现。

结果显示：Anti-LAG3(dose1)，Anti-LAG3(dose2)，其肿瘤体积的抑制率（TGI）分别为46.83%、70.29%，显示Anti-LAG3给药剂量为dose2的肿瘤抑制效果更好；Keytruda(dose1)，Keytruda(dose2)，其TGI分别为58.00%、60.52%，显示Keytruda两种给药剂量肿瘤抑制效果相近，均对肿瘤的生长有明显抑制作用。

结果表明：PD1、LAG3双人源化小鼠是评估anti-hPD1和anti-hLAG3抗体体内联合药效的理想动物模型。

3. C57BL/6-hPD1/hLAG3：Anti-hPD1及Anti-hLAG3抗肿瘤药效

在B6-hPD1/hLAG3小鼠皮下接种MC38肿瘤细胞系后测试抗人PD1和LAG3抗体肿瘤抑制药效。

左图：小鼠肿瘤生长曲线；右图：小鼠体重变化曲线

基于B6-hPD1/hLAG3小鼠皮下接种MC38模型的体内药效实验。将结肠癌细胞MC38培养至对数生长期后接种至6-8周龄的B6-hPD1/hLAG3（PD1和LAG3同时人源化小鼠）皮下，待肿瘤生长至平均体积约80-120mm³时随机分为Vehicle组（n=7）、 anti-hPD1单药组（n=6）、anti-hPD1和 anti-hLAG3联用组（n=6），使用相应药物进行治疗。每周给药2次，共给药4次。数据以Mean ±SEM形式呈现。

结果显示：anti-hPD1单药组对肿瘤生长抑制作用小（TGI=25.64%），anti-hPD1和 anti-hLAG3联用组对肿瘤生长抑制作用大（TGI=89.29%）（左图），小鼠体重变化趋势一致（右图）。

结果证明：PD1/LAG3双人源化小鼠是评估anti-hPD1和anti-hLAG3抗体体内联合药效的有力工具。

参考文献

[1] Sierro, Sophie, Pedro Romero, and Daniel E. Speiser. "The CD4-like molecule LAG-3, biology and therapeutic applications." Expert opinion on therapeutic targets 15.1 (2011): 91-101.

[2] Goldberg, Monica V., and Charles G. Drake. "LAG-3 in cancer immunotherapy." Cancer Immunology and Immunotherapy. Springer, Berlin, Heidelberg, 2010.269-278.

[3] Triebel, Frederic, et al. "LAG-3, a novel lymphocyte activation gene closely related to CD4." Journal of Experimental Medicine 171.5 (1990): 1393-1405.

[4] Huard, Bertrand, et al. "CD4/major histocompatibility complex class II interaction analyzed with CD4‐and lymphocyte activation gene‐3 (LAG‐3)‐Ig fusion proteins." European journal of immunology 25.9 (1995): 2718-2721.