首页> 活动&资源> 技术资源中心 > 药康分享>

手把手教你解决PCR实验(基因扩增实验)气溶胶污染问题

为什么我的试剂全换新了,还是一样的结果?

少量鉴定时结果很好,一旦提高样品数量污染又出现了?

之前常听说气溶胶污染,难道是它?

我们一起看看时下大火的ChatGPT怎么说?



听完还是迷迷糊糊的~还是请我司的鉴定大神来为我们解惑吧!

什么是PCR实验室气溶胶污染?

PCR扩增中的气溶胶污染一般指的是DNA/RNA气溶胶污染,是实验室中极易出现的一种空气污染。比如离心机离心、反应管剧烈摇动、PCR开盖和移液器反复吸样时,均会产生游离于空气中的小片段核酸,当它们附着在空气中的尘埃上时,就形成了我们常说的核酸气溶胶。

怎么判断PCR实验出现了气溶胶污染呢?

如果已经排除了体系污染和样品间交叉污染,但是以去离子水为模板依然可以扩增出目的条带,那就很有可能存在气溶胶污染了哦。如果出现这类PCR扩增假阳性的话,我们就不能正确判断小鼠的基因型啦!

另外,由于这类游离的气溶胶核酸片段含量极低,一般对于大片段的PCR扩增影响较小,所以通常出现在PCR产物为80-500bp的PCR反应中哦。



pcr实验室气溶胶污染处理方案

为了消灭气溶胶污染,我们可以做两方面努力:一是消除PCR污染;二是长期维护实验室环境整洁。

一、PCR污染规避措施:

1、在负压实验室、超净台、通风橱进行PCR实验;

2、更换新的试剂和耗材,如引物、酶、去离子水和EP管等;

3、更换PCR扩增区域,将扩增片段控制在700-800bp左右;

4、推荐使用降落PCR程序(Touch Down,简称TD)进行扩增,TD程序由于前面的循环使用较高的退火温度富集产物,对于解决污染、非特异性扩增、引物二聚体等问题有非常好的效果。

二、实验室环境维护方面:

1、保持良好的实验习惯:在PCR实验前,使用75%乙醇擦拭桌面和移液器;DNA提取、引物溶解、PCR体系配置时,尽量避免剧烈震荡,轻柔开合EP管;如发生样品飞溅时,使用75%乙醇至少擦拭桌面两次;

2、控制实验室环境:保持每天至少4个小时的通风(气溶胶污染尤其高发在冬夏开空调时期);

3、紫外照射:常规实验结束后,可设置紫外定时照射,每天照射2h,并注意开窗通风以避免富集臭氧。

想要系统性学习基因鉴定PCR的核酸提取、体系配置、程序设置、凝胶电泳以及异常案例解读等,我们为大家整理了一套《小鼠基因型鉴定使用说明书》,里面详细的介绍了我们的鉴定体系,是集萃药康每年100万+样品、600万+反应获得的经验。


上一篇:NCG-X: A novel animal model to evaluate preclinical studies 下一篇:合适的疾病小鼠模型是推动帕金森机制研究和新药开发不可或缺的工具
联系客服
提交