为什么我的试剂全换新了,还是一样的结果?
少量鉴定时结果很好,一旦提高样品数量污染又出现了?
之前常听说气溶胶污染,难道是它?
我们一起看看时下大火的ChatGPT怎么说?
听完还是迷迷糊糊的~还是请我司的鉴定大神来为我们解惑吧!
PCR扩增中的气溶胶污染一般指的是DNA/RNA气溶胶污染,是实验室中极易出现的一种空气污染。比如离心机离心、反应管剧烈摇动、PCR开盖和移液器反复吸样时,均会产生游离于空气中的小片段核酸,当它们附着在空气中的尘埃上时,就形成了我们常说的核酸气溶胶。
如果已经排除了体系污染和样品间交叉污染,但是以去离子水为模板依然可以扩增出目的条带,那就很有可能存在气溶胶污染了哦。如果出现这类PCR扩增假阳性的话,我们就不能正确判断小鼠的基因型啦!
另外,由于这类游离的气溶胶核酸片段含量极低,一般对于大片段的PCR扩增影响较小,所以通常出现在PCR产物为80-500bp的PCR反应中哦。
为了消灭气溶胶污染,我们可以做两方面努力:一是消除PCR污染;二是长期维护实验室环境整洁。
1、在负压实验室、超净台、通风橱进行PCR实验;
2、更换新的试剂和耗材,如引物、酶、去离子水和EP管等;
3、更换PCR扩增区域,将扩增片段控制在700-800bp左右;
4、推荐使用降落PCR程序(Touch Down,简称TD)进行扩增,TD程序由于前面的循环使用较高的退火温度富集产物,对于解决污染、非特异性扩增、引物二聚体等问题有非常好的效果。
1、保持良好的实验习惯:在PCR实验前,使用75%乙醇擦拭桌面和移液器;DNA提取、引物溶解、PCR体系配置时,尽量避免剧烈震荡,轻柔开合EP管;如发生样品飞溅时,使用75%乙醇至少擦拭桌面两次;
2、控制实验室环境:保持每天至少4个小时的通风(气溶胶污染尤其高发在冬夏开空调时期);
3、紫外照射:常规实验结束后,可设置紫外定时照射,每天照射2h,并注意开窗通风以避免富集臭氧。
想要系统性学习基因鉴定PCR的核酸提取、体系配置、程序设置、凝胶电泳以及异常案例解读等,我们为大家整理了一套《小鼠基因型鉴定使用说明书》,里面详细的介绍了我们的鉴定体系,是集萃药康每年100万+样品、600万+反应获得的经验。