cas9是什么?

　　Cas9是RNA引导DNA核酸酶，是天然原核免疫系统的一部分，赋予细菌产生对质粒和噬菌体等外源遗传物质的抵抗能力。在细胞内，Cas9核酸酶与引导RNA(gRNA)形成复合物，该复合物通过与基因组中的18-22nt的同源靶序列直接相互作用，gRNA与靶位点通过互补配对使Cas9定位到靶序列上，然后切割基因组中的靶位点。为了方便使用，我们设计的CRISPR/Cas9载体能够在一个载体上同时有效表达Cas9核酸酶(或缺刻酶)和引导RNA(gRNA)。

　　cas9基因敲除原理：

　　使用CRISPR打靶目的基因需要目标细胞同时表达Cas9和特异gRNA。这可以通过在同一个载体上共表达Cas9和gRNA，也可以通过在两个载体各上自表达Cas9和gRNA来实现。使用Cas9和gRNA两个载体分开表达的优势在于可使用不同的gRNA与不同的Cas9变体组合(如野生型Cas9，Cas9n，dCas9)，这取决于用户的实验目的。此外，使用单独的Cas9表达载体有利于生产稳转细胞株或者动物模型，然后使用不同的gRNA进行打靶。这种方式比起gRNA/Cas9共表达载体转导可以获得更高的打靶效率。

　　四种cas9基因敲除技术：

　　通过CRISPR/Cas9技术制备特定基因修饰的小鼠模型。CRISPR/Cas9是目前最常用的基因编辑技术，可用于制备CKO/KO/KI/PM等类型基因编辑小鼠。

1.基因敲除(Cas9 KO) 原理图解

CRISPR/Cas9 KO策略示意图

2、条件性基因敲除(Cas9 CKO)原理图解

CRISPR/Cas9 cKO策略示意图

3、基因敲入(Cas9-KI)原理图解

CRISPR/Cas9 KI策略示意图

4、点突变(Cas9-PM)原理图解

CRISPR/Cas9 PM策略示意图