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裸鼠皮下成瘤实验操作步骤及常见操作问题汇总

裸鼠成瘤实验,即在裸鼠皮下接种入肿瘤细胞,观察肿瘤的形成、发展及抗肿瘤药物的效果,在肿瘤学、免疫学、药品与生物制品的安全性评价及有效药品的筛选等实验方面,有着很高的研究价值。

  裸鼠皮下成瘤实验用小鼠:

  采用ABW® Matrigengel 高浓度基质胶(0827245)和细胞悬液进行1:1比例稀释,皮下接种至4-5周龄的BALB/c-nu雌性小鼠。

  裸鼠皮下成瘤实验流程:

  1、准备对数期生长的、细胞密度达80-90%左右的HepG2细胞,于收集细胞前一天晚上更换新鲜培养基。

  2、胰酶消化细胞,待细胞变圆未脱离培养皿时,去除胰酶,加入无血清培养基制成细胞悬液,离心清洗一次,重悬至终浓度为8×107个细胞/mL。

  3、将细胞悬液和 ABW® Matrigengel高浓度基质胶在4℃环境下按1:1比例进行稀释,制备成终浓度为4×107个细胞/mL。

  4、左手抓取固定裸鼠,于裸鼠左侧腋窝处皮下注射,接种时,针头在皮下进针深一点,约1cm深,以减少注射后细胞悬液从针眼溢出,接种体积为100μL。(这一过程尽量在半小时内完成,途中细胞悬液放在冰上以减缓细胞凋亡及防止出现凝胶现象。)

  5、将裸鼠放回笼内继续饲养,大约1周左右可看到肿瘤出现,并根据实验设计在肿瘤体积不超过1000mm3前对裸鼠进行anlesi,取出肿瘤,拍照。

  裸鼠皮下成瘤实验常见问题:

  1、这个实验为什么用裸鼠?

  裸鼠成瘤实验用的裸鼠,最大的特点是没有胸腺等免疫器官,它的免疫力几乎没有,对肿瘤细胞没有免疫作用,易于成瘤。

  自然状态下的老鼠和小白鼠有完整的免疫系统。免疫系统有免疫防御、免疫自稳、免疫监视三大生理功能,并通过免疫识别和免疫排斥攻击两大生理反应起作用。具有完整免疫系统的老鼠和小白鼠,会通过免疫识别反应来识别自己与非己,发现注入的肿瘤细胞这种非己抗原后,会启动免疫排斥攻击反应进行杀灭,这样肿瘤就很难形成,实验就难以进行下去。

  2、常见的荷瘤不成功可能的原因?

  (1)细胞状态差,活力不好,或肿瘤细胞不易成瘤,需加入Matrigengel辅助或增大接种量或更换细胞系;

  (2)可能是小鼠周龄太大,或小鼠免疫排斥,建议更换免疫缺陷程度更大的小鼠(Nod-scid小鼠,NOG小鼠>Nude裸鼠)。

  3、肿瘤长起来后又消失的原因?

  肿瘤生长过程中,如果出现肿瘤块先缩小,后变大的现象,很可能是由于炎症反应,肿瘤细胞被小鼠自身吸收造成的,如若后续肿瘤依旧未长出来,可考虑更换免疫缺陷程度更大的小鼠。

  4、造成肿瘤均一性很差的原因?

  如果同一分组内小鼠肿瘤体积差距很大,可能是由于小鼠的周龄及接种细胞量不一致造成的。

  5、是否可以应用免疫抑制剂加速肿瘤生长?

  如果裸鼠荷瘤不生长,可以采用免疫抑制剂如环磷酰胺(抑制裸鼠NK细胞活性)促进生长;不过最好不要为了缩短造模周期来加速生长,因为可能会造成溃烂,这样就不得不中止实验。

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