免疫系统人源化重建NCG小鼠模型常被用于大量的基础科学及及临床前药理药效研究中，从而在小鼠体内模拟人体免疫系统对药物的反应及相关机制探索。目前huPBMC人源免疫系统重建模型具有重建快、转化率高和成本低的优势，被广泛应用于多种靶点在T细胞的肿瘤免疫药物研发中。但由于异种人源细胞或组织对NCG小鼠的免疫系统具有攻击作用，故其重建后4-8周会陆续出现异体移植物抗宿主反应（GvHDgraft versus host disease）反应，GvHD的发生容易导致小鼠死亡，从而影响实验的开展。

自主研发的二代品系NCG-MHC-dKO小鼠检测实验数据

针对这一难题，集萃药康自主研发的二代品系NCG-MHC-dKO小鼠闪亮登场！NCG-MHC-dKO模型以NCG小鼠为背景通过CRISPR/Cas9基因编辑技术将MHCI类和II类分子基因敲除，破坏MHCI类和II类分子功能，得到NCG-MHC-dKO品系小鼠。该小鼠可以显著减缓 GvHD发生、延长实验的窗口期，并保证免疫细胞比例正常和抗体分子评价的准确性，同时不影响IgG的半衰期。

1. NCG-MHC-dKO小鼠体内MHCI/II检测

图1 NCG-MHC-dKO 小鼠的MHCI/II检测

采用H2Kd和H2Db抗体检测NCG及NCG-MHC-dKO小鼠MHCI的表达、I-Ak抗体（crossreactivity to I-Ag7）检测小鼠 MHCII 的表达，在对照NCG小鼠的DC细胞中能检测到H2Kd、H2Db和I-Ak的表达，但NCG-MHC-dKO小鼠的DC细胞中未检测到H2Kd、H2Db和I-Ak的表达。

2. NCG/NCG-MHC-dKO 小鼠的免疫细胞分群检测

图2 NCG/NCG-MHC-dKO小鼠的免疫细胞分群检测

在NCG-MHC-dKO小鼠中敲除MHCI和MHCII后，对其免疫细胞分群进行检测，结果发现 T、B、NK、单核细胞、中性粒细胞以及树突状细胞与NCG小鼠几乎一致。

3. NCG-MHC-dKO小鼠的人源PBMC重建

图3 人源PBMC的重建效率

在NCG和NCG-MHC-dKO小鼠注射人源PBMC后，在NCG和NCG-MHC-dKO小鼠中均能较好的进行免疫重建，重建的细胞主要以人源T细胞为主，重建效率最高可达50%左右。

4. NCG-MHC-dKO小鼠的人源PBMC重建

图4 人源PBMC重建后小鼠体内hCD4和hCD8的细胞水平

5. NCG-MHC-dKO小鼠人源PBMC重建后的生存率和GvHD评分

图5 NCG-MHC-dKO小鼠人源PBMC重建后的生存率和GvHD评分

NCG和NCG-MHC-dKO小鼠在注射人源PBMC后，观察小鼠的生存变化，发现敲除MHCI和MHCII 后可显著改善小鼠重建后的死亡情况。通过观察小鼠的体重、皮肤、毛发、姿态以及活动状态来评定GvHD发生情况，结果发现敲除MHCI和MHCII 后可显著降低小鼠PBMC重建后GvHD的产生。

6. hIgG 半衰期

图 6 在NCG、NCG-B2M、NCG-MHCI-KO和NCG-MHC-dKO小鼠血清中人IgG半衰期变化

与NCG小鼠相比，NCG-B2M小鼠的hIgG清除速度更快，而NCG-MHC-dKO小鼠的hIgG半衰期与NCG小鼠相似。

7. NCG-MHC-dKO小鼠药效验证

图7 在MDA-MB-231肿瘤异体移植模型NCG-MHC-dKO小鼠中的PD-L1药效测试

与对照组相比，NCG-MHC-dKO小鼠加药组在重建huPBMC后表现出良好的抗肿瘤效果。

综上，NCG-MHC-dKO小鼠有利于人源PBMC的重建，可以显著减缓GvHD发生、延长实验的窗口期，并保证免疫细胞比例正常和抗体分子评价的准确性，同时不影响IgG类抗体药物在体内的半衰期，是助力您科学研究的好帮手！

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参考文献：

1. Sprent J, Webb SR: Function and specificity of T-cell subsets in themouse. Adv Immunol 41:39—133, 1987.

2. Madsen L, et al., Mice lacking all conventional MHC class II genes. Proc Natl Acad Sci U S A. 1999 Aug 31;96(18):10338-43.

3. Brehm, Michael A., et al. "Lack of acute xenogeneic graft-versus-host disease, but retention of T-cell

function following engraftment of human peripheral blood mononuclear cells in NSG mice deficient in

MHC class I and II expression." The FASEB Journal (2018): fj-201800636R.