在上一期我们给大家介绍了基于高脂饮食、营养素缺乏饮食及毒素等方式诱导的NASH 模型，但由于代谢紊乱特征弱或造模周期过长，所以在实际应用上面临着一定问题，或无法很好复刻人类NASH病症特点。因此，需要开发更贴近人类病症的NASH模型。

NASH的特征性病变主要体现在肝脏病理组织学上，肝脏需同时出现肝细胞脂肪变性、气球样病变以及炎症等表型。临床上为了更好界定NSAH病人，研究人员也提出了相应的评分系统，主要包括NAS (NAFLD activity score) 和SAF (steatosis activity fibrosis)，其中NAS应用范围更加广泛。

Ø NAS评分根据脂肪变性、肝细胞气球样变性、小叶炎症三个维度评分（0~8），NAS≥5分可诊断为NASH，NAS<3分排除NASH，NAS 3～4分为NASH可能。

Ø 肝纤维化是NASH的组织学特征，从F0到F4定义为：无纤维化（F0）；窦周或门脉周围纤维化（F1）；窦周纤维化合并门脉周围纤维化（F2）；形成桥接样纤维化（F3）；肝硬化（F4） 。

表1. NAFLD活动度评分

模拟临床病人进行NASH药物临床前研究的小鼠模型一方面需要有肥胖、高血糖/血脂等代谢紊乱特征，另一方面需要有肝脏病理特征，而肝脏病理特征则可参考上述NSA评分系统进行打分，根据评分判断是否可作为NASH研究模型。

目前，除了印度药物管理局（DCGI）批准上市的PPARα/γ双重激动剂Saroglitazar，可用于治疗非肝硬化性非酒精性脂肪性肝炎（NASH）患者，尚无其他疗法获得FDA的批准。NASH治疗药物开发任重道远，选择合适的NASH模型，不仅可以大大缩短成模时间，还能模拟人类患者的代谢紊乱特征和肝脏病理组织学等特点，助力探索NASH发病机制和治疗药物开发。

复刻人类NASH病症的小鼠模型

Ø BKS-db NASH

BKS-db是一种经典II型糖尿病模型，它具有严重的肥胖表型，同时具有高血糖症、高血脂症和胰岛素抵抗等代谢紊乱特征，并且随着周龄增加，在大周龄BKS-db（约16周）中可以观察到一定程度的脂肪肝表型。为了缩短脂肪肝形成的时间，我们采用西方饮食（Western Diet，高脂、高果糖、高胆固醇）对BKS-db进行喂养，获得BKS-db NASH模型。该模型构建周期短，仅喂养4周小鼠便出现了更高的体重、血糖和血脂水平，同时具有严重的肝脏损伤以及典型的肝脏NASH样病变（图1-2）。

图1. WD喂养4周后BKS-db小鼠肝脏中出现显著的脂肪变性、炎症以及气球样病变，且油红染色观察到大量脂质沉积。

图2. 通过NAS评分系统对小鼠进行打分，BKS-db NASH模型在WD诱导4周后的评分为5.8分，可用作NASH发病机制研究及相关治疗药物评价。BKS-db NASH模型在4周后评分基本进入平台期，随周龄增加，评分并未显著增加。

药效案例展示

实验设计及目的：将BKS-db小鼠根据体重和禁食血糖进行分组，分为溶媒组和阳性药组（MGL-3196），然后使用西方饮食诱导4周，诱导同时给药，评估药物（MGL-3196）在小鼠体内的药效。其中，BKS正常饮食小鼠给予溶媒作为正常对照组。

   图3. MGL-3196显著改善BKS-db NASH脂肪肝表型，从组织病理上看，脂肪变和脂质堆积表型也得到一定程度改善，NAS评分5.8分下降到3分左右。

Ø B6-Alms1-del NASH

ALMS1是一个与人类Alström综合征相关的基因，该基因突变/缺失会出现儿童肥胖、发育迟缓、高血脂症、心肌疾病及Ⅱ型糖尿病等代谢综合征。集萃药康采用基因编辑技术对鼠源Alms1基因8号外显子特定序列造成11bp碱基缺失，使小鼠Alms1基因提前终止翻译，形成具有肥胖、糖尿病及非酒精性脂肪肝病综合表型的Alms1突变小鼠模型。它在普通饲料（CD）的喂养下即可出现肥胖、中度高血糖症状，且随着年龄增长，高脂血症以及肝脏损伤会逐渐恶化。西方饮食饲料（WD）的喂养会加速其代谢紊乱和肝脏损伤进程（图4）。

相较BKS-db NASH模型，B6-Alms1-del NASH模型还具备中度肝脏纤维化的特点（图4），可用于评估抗NASH药物对肝脏纤维化的治疗效果。

图4. B6-Alms1-del小鼠在正常饲料（CD）喂养下，21周龄时出现了脂肪肝表型，但评分只有4.2分，未到达NASH程度。 B6-Alms1-del小鼠在西方饲料（WD）喂养下，6周后就表型出明显的脂肪变、炎症、气球样病变以及中等程度纤维化。NAS评分为6.0分，纤维化评分为1.6分。

药效案例展示

实验设计及目的：将西方饮食诱导6周后的B6-Alms1-del小鼠根据ALT指标进行随机分组，按照组别分别给予溶媒、药物MGL-3196和Semaglutide，给药的同时依然维持西方饮食喂养，评估药物在小鼠体内的药效。其中，B6J正常饮食小鼠给予溶媒作为正常对照组。

图5. 药物MGL-3196和Semaglutide一定程度缓解B6-Alms1-del小鼠的脂肪变和纤维化表型，评分得到一定成程度降低。

NASH小鼠模型列表

综上，基于BKS-db和B6-Alms1-del基因编辑小鼠构建的NASH小鼠模型具有显著的代谢紊乱特征以及更短的造模周期，相比以往的传统模型更能满足研究者的实验需求。然而，真实人群中db和Alms1基因突变频率非常低，所以此类基因编辑模型与临床发病机制存在较大差异，仍需开发更”拟人“的NASH评价模型。下一期我们将分享一款更贴合人类病程发展的NASH研究模型-750野生鼠。