当利用小鼠模型进行研究时,可能需要在特定的组织中进行基因改造,或者使基因改造仅在小鼠生命周期的某一特定时期被激活,能够进行这种控制的小鼠模型称为条件性小鼠模型。构建条件性小鼠模型最有效的方法之一是通过Cre-loxP系统实现。
Cre 工具鼠的构建四种方法
目前有四种常见Cre 鼠的构建策略,每种方法各有其优点和不足,选择哪种方法根据科研目的和实际情况而定,下面为大家简单介绍下这几种模型。
1. 质粒表达载体Cre 鼠模型:通过受精卵原核注射的方法,获得Cre 随机插入基因组的转基因小鼠。
2. 定点敲入Cre 鼠模型:利用CRISPR/Cas 技术将 Cre 基因定点敲入相关内源基因位点,依靠内源性基因调控序列确定Cre 表达特征。
3. BAC转基因Cre 鼠模型:将Cre基因先敲入至BAC 克隆的特定基因调控元件序列后,构建BAC克隆载体,并将此 BAC 载体进行受精卵原核注射法,构建BAC转基因Cre小鼠模型。虽然该转基因技术也是随机整合插入,但其具有降低了质粒DNA随机插入引起的位置效应影响,避免了Cre 基因5』端敲入可能引起的杂合缺失有表型等方面的优势。
4. 安全位点敲入Cre小鼠模型:目前的Cre 小鼠模型构建策略。为了避免基因随机插入可能导致诸多不利因素影响(比如表达位置影响作用及插入突变等),通过将 Cre 定点敲入到所谓的「安全」位点。
Cre工具鼠主要分为3类:全身性Cre、组织特异性Cre 和配体或药物诱导Cre。
1、全身性Cre:通过诱导剂来调节驱动Cre重组酶的启动子活性。
2、组织特异性Cre:由组织特异性启动子表达,一般需要两种转基因小鼠交配使用。例如Alb-Cre、Lyz2-Cre 等。
3、配体或药物诱导Cre:通过将Cre 重组酶与激素受体的配体结合域(ligand-bindingdomain,LBD)相融合,形成定位于胞浆的融合蛋白,只有在激素诱导后,融合的 Cre 蛋白才会通过构象变化从锚定蛋白 HSP90 上解离下来,进入细胞核,识别loxP 位点并发生重组。点击进入集萃药康cre工具鼠商城